杨 斌 , 陈 贇 , 周六化 , 孙则禹 , 戴玉田
南京大学学报(自然科学版). 2010, 46(1): 92-99.
同时分离和培养兔外周血平滑肌祖细胞 (SPC) 和内皮祖细胞 (EPC) , 为组织工程膀胱的构建和血管化提供种子细胞 . 分离新西兰兔外周血中的单个核细胞 , 分别进行 SPC 和 EPC 的分离和培养 ; 同
时 , 培养兔膀胱平滑肌细胞 (BSMC) 作为对照 . 细胞爬片 , 观察细胞摄取 Dil - AcLDL 和结合 FITC -UEA-1 的能力 ; 间接免疫荧光染色观察平滑肌肌动蛋白 (SMA) 、 结蛋白 (Desmin) 、 KDR 、 eNOS 和 vWF 的表达
情况 ; 进行细胞增殖实验 , 观察 PDGF -BB ,VEGF 对 SPC 和 EPC 的增殖作用 . 结果发现 , 培养 1 周后出现 SPC 克隆和 EPC 克隆 ,SPC 呈梭形 , 长短不一 ;EPC 形态均一 , 呈典型的鹅卵石形 ; 培养的 BSMC 形
态均一 , 为长梭形 , 呈峰谷样形态 . 利用克隆环分离 SPC 和 EPC 克隆 , 继续培养可得到高纯度的 SPC 和EPC. SPC 不摄取 Dil - AcLDL , 不结合 FITC - UEA - 1 ;SPC 表达 SMA 、 Desmin 和 KDR , 不表达 eNOS 和
vWF. EPC 同时摄取 Dil - AcLDL 和结合 FITC -UEA- 1 ; EPC 表达 eNOS 、 vWF 和 KDR , 不表达 SMA 和Desmin.BSMC 仅表达 SMA 和 Desmin. PDGF - BB 仅能促进 SPC 增殖 ,VEGF 仅能促进 EPC 增殖 , 均具
有剂量依赖效应 . 本研究建立了同时分离和培养外周血 SPC 和 EPC 的技术 , 所培养的细胞具有较高的纯度 , 可以作为种子细胞进行组织工程膀胱及其血管化的研究和应用