潘旭萍 1, 2 , 高子燊 3 , 于红霞 3 ,韩晓冬 1, 2 * *
南京大学学报(自然科学版). 2010, 46(2): 221-228.
壬基酚( NP) 是一种环境内分泌干扰物, 具有类雌激素作用, 它的高稳定性和脂溶性的特点使其能够在有机体, 特别是脂肪组织内聚集, 对人类的生殖系统产生毒害作用, 因其分子结构与细胞膜的
磷脂分子很相似, 故与磷脂分子有很高的亲和力. 为了探讨 NP 对生殖细胞的毒理机制, 了解其在细胞内的分布情况, 建立大鼠睾丸支持细胞 NP 含量的高效气相色谱及质谱( 即 GC/ MS) 检测方法, 观察 NP
在细胞中的分布. 实验采用原代培养的大鼠睾丸支持细胞, 通过带有 CY3 标记的抗体对其质膜上特异表达的卵泡刺激素受体( FSHR ) 进行免疫荧光染色, 鉴定支持细胞. 然后用 10μ mol/ L 和 20μ mol/ L 的
NP 分别作用细胞 3 h、6 h、12 h、24 h 后, 超声破碎, 并对 10μ mol/ L NP 处理的样品用改进的三步离心法进行细胞质膜分离, GC/ MS 方法检测 NP 在细胞中的总含量, 以及细胞膜中 NP 含量占细胞中的总含量
的比例. 结果显示培养的细胞均呈现绿色荧光, 都表达 FSHR. 两步离心的质膜分离方法, 膜纯度为33 .22%, 改进的三步离心法膜纯度为 78. 60%. 另外, 分别在 10μ mol/ L 和 20μ mol/ L NP 浓度下, 随着
作用时间的延长, NP 在细胞中的总含量逐渐增加至 12 h, 在 24 h 时突然下降至 3 h 的水平. 细胞膜中NP 含量占细胞中的总含量的比例, 随着作用时间的延长而降低. 由此得出结论是: FSHR 可以作为大鼠
睾丸支持细胞的鉴定指标; 三步离心的质膜分离方法得到的膜纯度远远高于两步离心法; 虽然 NP 与磷脂分子有很高的亲和力, 但随着作用时间的延长 , NP 并没有停留在细胞膜里, 而是能够穿过细胞膜进入
到细胞内, 并主要分布在细胞内.